1. 小栗旬 饰 坂田银时 人称“万事屋阿银”、“白夜叉”，坚信并贯彻自己的“武士道”的男人，死鱼眼，喜欢甜食。
2. 菅田将晖 饰 志村新八 眼镜是本体，吐槽担当。
3. 桥本环奈 饰 神乐 具有极高战斗力的夜兔族，力气大饭量更大，喜欢吃醋海带。
4. 长泽雅美 饰 志村妙 志村新八的姐姐。工作是陪酒女，擅长黑暗料理。
5. 冈田将生 饰 桂小太郎 人称“狂乱贵公子”、“逃跑的小五郎”，绰号“假发”。拥有宠物伊丽莎白——网友戏称电影中还原度最高的角色。
6. 室毅 饰 平贺源外 江户第一发明家。
7. 堂本刚 饰 高杉晋助 银魂世界中的反政府恐怖分子，成立鬼兵队。
8. 新井浩文 饰 冈田似藏 人称“人斩似藏”，盲人剑客。
9. 菜菜绪 饰 来岛又子 有“红色子弹”之称，爱慕高杉。
10. 佐藤二朗 饰 武市变平太 鬼兵队的参谋长。自称喜欢小孩子的女权主义者，其实就是萝莉控。
11. 安田显 饰 村田铁矢 铁匠村田铁子的哥哥。把铸剑视为生命，希望打出超越父亲的名剑。
12. 早见明里 饰 村田铁子 沉默寡言的冷美人，为坂田银时打造了龙形武士刀。
13. 中村勘九郎 饰 近藤勋 真选组局长，老好人，爱好对志村妙花式跟踪。角色还原“大猩猩”形象。
14. 柳乐优弥 饰 土方十四郎 有“鬼之副长”之称。老烟枪，爱吃蛋黄酱。
15. 吉泽亮 饰 冲田总悟 腹黑毒舌，十足的抖S，时不时拿火箭筒干掉看着不爽的人。